Introdução: O tratamento com doxorrubicina (DOX) pode induzir cardiotoxicidade, pela modificação precoce da expressão de genes e marcadores de estresse cardíaco. O miRNA-208a é um marcador epigenético de estresse e remodelamento cardíaco, regulando a expressão de β-miosina de cadeia pesada (β-MCP) através de seus alvos.
Objetivos: Avaliar o efeito preventivo da inibição do miRNA-208a no estresse cardíaco provocado pela DOX, em cultura primária de cardiomiócitos de neonatos.
Métodos: Os cardiomiócitos foram extraídos de corações de ratos Wistar neonatos, isolados por gradiente de Percoll e plaqueados a 1,34.105células/well. Após 48h, foram transfectados com 10 nM de antimiR-208a ou Controle negativo. Após 72 h foram tratados com 0,5 uM de DOX ou não e divididos em 4 grupos: Controle (C), DOX (D), antimiR-DOX (AD) e antimiR (A). qRT-PCR foi realizado para avaliação da expressão dos miRNA-208a, -208b e -499, α-actina esquelética (α-act) e Fator Natriurético Atrial (ANF). A atividade da lactato desidrogenase (LDH) do meio celular foi avaliada por fluorimetria, para avaliar morte celular. O conteúdo proteico dos alvos dos miRNAs: Sox6, Purβ Med13, α-MCP e β -MCP, foram avaliados por Western Blotting. A área de superfície celular foi marcada por α-actinina por imunofluorescência.
Resultados: Houve um aumento de 499% (p<0,001) do miRNA-208a em D vs. C, AD e A. miRNA-208b aumentou 67% (p<0,005) em D e diminuiu em AD e A vs. C (p<0,001). O miRNA-499 aumentou 135% (p<0,001) em D e diminuiu em AD (p<0,006) e A (p<0,05) vs. C. A expressão gênica de α-act diminuiu em A vs. C (p<0,01), D (p<0,05) e AD (p<0,005), e a de ANF aumentou em D vs. C (p<0,01), A (p<0,05) e AD (p<0,01). A atividade da LDH aumentou em D comparado a outros grupos (p<0,005). DOX diminui a expressão de Sox6 em 60% (p<0,03), de Purβ em 61,4% (p<0,001) e de Med13 em 27% (p<0,01). DOX diminuiu a relação α/β-MCP (p<0,05) e o antimiR-208a preveniu essa diminuição, bem como aumentou a área de superfície contrátil das células comparado aos C e D (p<0,006). Conclusões: O AntimiR-208a previne o estresse celular provocado pela DOX, pelo aumento da expressão dos alvos dos miRNAs-208a, -208b e 499, da superfície contrátil das células, e da relação α/β-MCP.
